时间：2015-12-21 01:47:00 所属分类：计算机技术 浏览量:
【摘要】 目的 利用淋巴管内皮生长因子受体3(VEGFR3)检测胃癌组织内微淋巴管密度(MLD)，研究其与增殖期细胞核抗原(PCNA) 及临床因素之间的相关性。方法 采用免疫组化法，以VEGFR3 (又称FLT4) 为标记物，检测60例胃癌淋巴结转移组织内MLD与增殖期细胞核
【摘要】 目的 利用淋巴管内皮生长因子受体3(VEGFR3)检测胃癌组织内微淋巴管密度(MLD)，研究其与增殖期细胞核抗原(PCNA) 及临床因素之间的相关性。方法 采用免疫组化法，以VEGFR3 (又称FLT4) 为标记物，检测60例胃癌淋巴结转移组织内MLD与增殖期细胞核抗原(PCNA) 蛋白及临床病理因素之间的相关性。结果 胃癌淋巴结转移组织VEGFR3阳性率和MLD明显增高;胃癌组织中MLD与PCNA之间呈正相关。结论 VEGFR3可促进肿瘤微淋巴管生成,VEGFR3和MLD的表达可能与胃癌的淋巴结转移相关。
【关键词】 胃癌;淋巴管内皮生长因子受体3;微淋巴密度
ABSTRACT：Objective To detect the lymphatic microvessel density(MLD) in gastric cancer by lymphatic endothelial growth factor receptor3(VEGFR3) and to study the correlation between the proliferating cell nuclear antigen(PCNA) protein and clinicopathological factors.Methods VEGFR3 was used as a marker to detect the expression of MLD and PCNA protein in 60 cases of gastric cancer tissues by immunohistochemical method.Results The positive rate of VEGFR3 and MLD were significantly increased in gastric cancer with lymph node metastasis,and there was a positive correlation between.MLD and PCNA in gastric cancer.Conclusion VEGFR3 might promote microtumor lymphangiogenesis,and VEGFR3 and the expression of MLD may be related to lymph node metastasis of gastric cancer.
KEY WORDS：Gastric cancer;Lymphatic endothelial growth factor receptor 3;Lymphatic microvessel density
肿瘤的侵袭和转移是患者死亡的重要原因之一。胃癌早期以淋巴转移为主，晚期才发生血行转移。尽管淋巴管在胃癌转移中的作用非常明确，但因长期未发现明确的淋巴管内皮标记物和淋巴管生成因子，使人们对胃癌淋巴管生成(lymphangiogenesis)的研究相对滞后于胃癌血管生成(angiogenesis)。淋巴管内皮生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor3，VEGFR3)是VEGF基因家族成员VEGFC的受体，主要在淋巴管内皮细胞和单核细胞系造血细胞中表达。因此，VEGFR3可作为淋巴管内皮细胞的标记物，以区别于血管内皮细胞[1,2]。本实验采用免疫组化法和图片分析法，检测胃癌组织中VEGFR3和微淋巴管密度(microlymphatic density，MLD)的表达并探讨其与增殖期细胞核抗原( proliferating cell nuclear antigen，PCNA)及临床病理因素之间的相关性。
1 材料与方法
1.1 标本来源
选择1999～2002年在咸宁学院附属第一医院手术切除的胃癌标本共60例，并取距离癌组织>5cm的正常组织作对照。患者中男48例，女12例，年龄32～76岁，平均58岁。标本均经10%的中性福尔马林固定，常规石蜡包埋。
1.2 实验试剂与材料
兔抗人VEGFR3多克隆抗体、小鼠抗人PCNA单克隆抗体、即用型链酶亲合素生物素过氧化物酶复合物试剂盒。试剂盒组成(福州迈新公司)：A：内源性过氧化酶阻断剂(无色)，B：动物非免疫血清(羊，蓝色)，C：生物素标记的羊抗鼠/兔IgG(黄色)，D：链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶(红色)。试剂盒不含酶底物显色剂及复染剂。
1.3 方法
按试剂盒说明书方法操作。
1.4 结果判断
VEGFR3蛋白主要表达于胃癌细胞及正常胃黏膜上皮细胞的胞质和(或)细胞膜上。测微淋巴管密度(MLD) ,先在低倍镜(SP×200) 视野下观察，选择VEGFR3 阳性细胞最多的3个视野, 然后分别在高倍镜(SP×400) 视野下计数。染色的单个游离内皮细胞(排除肿瘤细胞或其他基质细胞)计为1条微淋巴管，成簇状相连或形成管状结构的细胞团计为1条微淋巴管，有血管平滑肌的管状结构不计入内。取其中计数最多的1个高倍镜视野内的微淋巴管数作为该组织的MLD。
PCNA 采用免疫反应半定量评分[3]。按染色强度评分: 0分为无染色,1分为染色较弱(浅黄色) , 2分为中等强度染色(棕黄色) , 3分为强染色(棕褐色)。按染色细胞的百分比评分:0分为无阳性细胞,1分为染色细胞<10%, 2分为染色细胞在11%～50%之间, 3分为染色细胞在51%～80%之间, 4分为染色细胞>80%。两种评分相乘即得出免疫反应评分, 范围在0～12分之间。
1.5 统计学处理
对MLD、PCNA行KolmogorovSmirnov Z检验。不符合正态分布，故用中位数(四分位间距)表示，采用MannWhitney U检验;相关性检验采用Spearman等级相关及单因素Logistic回归分析，给出OR 值( 95%可信区间)。所有统计采用SPSS10.0软件进行计算。
2 结 果
2.1 胃癌和正常组织中MLD检测
通过免疫组化法染色,检测到胃癌和胃正常组织中MLD分别为6(4.00～8.00)和3(2.00～5.75)，胃癌组织中MLD明显增高(U=201.5，P=0.01)。(图1，2)图1 胃癌中MLD的阳性表达 (SP×200)图2 胃癌中VEGFR3的阳性表达 (SP×400)
2.2 胃癌组织中MLD 与PCNA 之间的相关性MLD 与PCNA之间有相关性(r=0.26，P<0.05)。
2.3 胃癌组织中MLD与临床病理因素之间的相关性
胃癌组织中MLD与患者淋巴结转移状况有相关性(r=0.33,P<0.05), 与其他临床病理因素之间无相关性,见表1。表1 胃癌组织中MLD 与临床病理因素之间的相关性
2.4 胃癌组织中MLD 对淋巴结转移影响的单因素Logistic 回归分析
按中位数将MLD 分成高低两组，行单因素Logistic 回归分析显示MLD 对淋巴结转移有影响，高MLD组发生淋巴结转移的风险是低MLD 组的3.51倍( 95%可信区间为1.20～10.24，P= 0.02)。
3 讨 论
近来研究表明，癌细胞可以诱导肿瘤内淋巴管生成，并通过侵入淋巴管而发生区域淋巴结转移[4]。区域淋巴结转移是胃癌患者重要的预后因素，也是临床上选择术后辅助化疗或放疗的重要标准。VEGFR3是VEGF基因家族成员VEGFC 的受体,作为VEGFC 的受体, VEGFR3主要在淋巴管内皮细胞和单核细胞系造血细胞中表达, 因此可作为淋巴管内皮细胞的标记物, 以区别于血管内皮细胞[1，2]。多数学者研究认为, MLD与胃癌区域淋巴结转移有相关性[5，6]，可能是因为MLD 高则癌细胞更易侵犯淋巴管[6]。但有少数学者研究认为MLD与区域淋巴结转移无相关性[7，8]。至于MLD 是否与胃癌患者预后有关，研究报道不多，结果也不一致[5, 6]。本研究以VEGFR3 抗体为标记物检测发现，胃癌组织中MLD明显高于正常组织，癌组织中MLD与淋巴结转移状况有相关性，高MLD 组发生淋巴结转移的风险是低MLD组的3.5倍。因尚未取得完整的随访资料，无法判断MLD的预后价值，有待今后进一步研究。另外，本研究发现胃癌组织中MLD与PCNA 之间呈正相关，提示胃癌淋巴管生成活性强则胃癌细胞的增殖活性也较强。
【参考文献】
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