绿海龟腐皮病病原体的Biolog鉴定

时间：2015-12-21 01:03:14 所属分类：水产与渔业 浏览量:

摘 要：对海南省海口、文昌、琼海、陵水、三亚等市县的绿海龟养殖场所开展调查，发现腐皮病为常发病之一;分离纯化得到的2个菌株，经过Biolog鉴定为Pseudomonas medocina和Pseudomonas viridilivida;对6只绿海龟进行人工感染实验，发现分离到的Pseudomonas me

　　摘　要：对海南省海口、文昌、琼海、陵水、三亚等市县的绿海龟养殖场所开展调查，发现腐皮病为常发病之一;分离纯化得到的2个菌株，经过Biolog鉴定为Pseudomonas medocina和Pseudomonas viridilivida;对6只绿海龟进行人工感染实验，发现分离到的Pseudomonas medocina和Pseudomonas vitidilivida对其具有致病力;药敏试验发现Pseudomonas medocina对头孢他啶、卡那霉素等药物敏感，对新霉素、阿奇霉素、氯霉素等不敏感;Pseudomonas viridilivida对妥布霉素、诺氟沙星、氯霉素等药物高度敏感，对头孢他啶、氧氟沙星等药物不敏感。为绿海龟腐皮病的防治提供科学依据。

　　关键词：绿海龟; 腐皮病; 分离鉴定; 细菌

　　世界上现在存活的海龟有2科6属7种，分别是绿海龟(Chelonia mydas)、玳瑁(Eretmochelys imbricata)、蠵龟(Caretta caretta)、太平洋丽龟(Lepidochelys olivacea)、棱皮龟(Permochelys coriacea)、大西洋丽龟(Lepidochelys kempii)、平背海龟(Chelonia depressa)，其中绿海龟(Chelonia mydas)的主要繁殖地分布在沿太平洋海岸线从墨西哥至厄瓜多尔的Galapagos群岛一带，其中一些较大的繁殖区分布在加勒比海岛国。主要产卵地有澳大利亚的南、北大堡礁、马来西亚的沙巴龟岛、沙特、也门、泰国、中国(主要在南海诸岛)和菲律宾等地。我国海龟资源主要分布在南海海域，以西沙和南沙群岛海域最为丰富，其次为南海北部海域。19世纪40年代前，海南岛东南沿海的琼海万宁、陵水、东方、三亚等县的沙滩都发现海龟产卵，现在只有极少的荒凉沙滩偶有发现。19世纪90年代我国南海海域海龟数量最多达到40 000只左右[1]，而现存成年绿海龟不到2 000只[2]。海龟资源的现状引起国际社会的高度重视，所有存活海龟种类均列入《国际濒危动植物保护公约(CITES)》和《国际自然保护联盟(IUCN)》的保护物种名录。我国已经将海龟的所有种都列为国家二级重点保护动物，农业部还组织制定《中国海龟保护行动计划》开展海龟资源保护工作[3]。但鲜有关于海龟疾病的研究报道。

　　2013年8月我们对海南省海口、文昌、琼海、陵水、三亚等市县进行调查，发现渔民作业过程中时有误捕到海龟，其中以绿海龟最多。误捕的绿海龟其腹甲、背甲、四肢等常有破损，出现溃烂等症状，没有得到有效治疗将导致死亡。本研究通过对绿海龟腐皮病病原体进行分离鉴定、攻毒试验和药敏实验，明确发病原因和敏感药物，为科学防治提供依据，进而有效保护绿海龟。

　　1　材料与方法

　　1.1　调查区域概况　龟海龟医院：911海龟救助组织(Sea Turtles 911)的海龟医院位于在海南省陵水黎族自治县新村港，附近渔民出海打渔误捕到生病的海龟集中在此医治。2013年8月此处寄养绿海龟13只，玳瑁2只。

　　三亚某温泉养生酒店：位于中国三亚海棠湾，区内用淡水饲养两只质量超过50.00 kg的绿海龟，供游客观赏。

　　鹿回头村：位于海南省三亚市的海滨村庄，该处分布有大量民宿，其中一些民宿常养殖绿海龟供游客观赏。

　　潭门农户：海南省琼海市潭门镇是一个通往南海三沙海域作业的主要港口，大量渔船集散在此，渔民在三沙海域作业误捕的绿海龟也时有在潭门出现。

　　1.2　调查方法　在海南岛主要养殖区域选取旅游区养殖点、游艇码头养殖点、酒店养殖点、放生养殖点、屠宰养殖点等有代表性的绿海龟养殖点进行入户实地调查，记录绿海龟只数、患病种类、主要症状、部位、预防措施、治疗办法等信息。

　　1.3　实验材料

　　1.3.1　实验动物　海龟医院的取样病龟头体长约50.0 cm，体重约6.90 kg，每只海龟每天喂一次0.75 g空心菜和某品牌海水鱼膨化饲料，医院对虚弱的病龟注射营养液补给能量。误入渔网使海龟腹甲致伤，用棉签擦取病处分别放入0.7%NaCl溶液和无菌管内，各自标记为Lf-01和Lf-02。

　　酒店温泉池取样病龟头体长101.0 cm，体宽73.5cm，每天每只龟分三次喂养共5kg的生菜，但由于食物单一、水质淡化等原因，海龟体质明显减弱，体重下降，眼睛发炎，池内的瓷砖对龟腹部有较强摩擦，造成左右脚磨损溃烂。取左右脚病样标记为SJ-01和SJ-02.

　　鹿回头村头体长44.0 cm，体宽34.3 cm的海龟是游客随机喂鱼虾或者树叶，海龟直接生活在水泥池中，池中海水很少，不足以浮起海龟，龟腹甲直接与水泥接触磨损后感染，几乎磨透腹甲。酒精对其表面消毒后，用棉签擦取患处，放入无菌管内标记为Sf-01。

　　潭门取样病龟头体长60.0 cm，体宽44.5 cm。酒精擦拭患处，用无菌棉签擦取腹甲病处或直接剪下腐烂处放入无菌管内，贴好标签Qf-01和Qf-02。

　　攻毒试验用龟来源于海南省琼海市潭门镇，六只30日龄绿海龟。

　　1.3.2　主要试剂及材料　营养琼脂粉(天津市大茂化学试剂厂);BIOLOG培养基(美国BIOLOG公司);BIOLOG接种液(美国BIOLOG公司);解剖工具(上海康桥齿科医械厂);双人单面洁净工作台(SW-CJ-2D，苏州苏洁净化设备有限公司);手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅(SYQ-DSX-280B，上海中安医疗器械厂);干热灭菌箱(DHP-9272上海一恒科学仪器有限公司);生化培养箱(BPC-250F，上海一恒科学仪器有限公司);Biolog自动微生物鉴定系统(美国BIOLOG公司);药敏试纸(北京天坛药物生物技术开发公司);冰箱(BCD-206KCB，青岛海尔股份有限公司)等

转载请注明来自：http://www.zazhifabiao.com/lunwen/nykx/scyyy/35713.html