利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定

时间：2015-12-21 01:05:51 所属分类：畜牧 浏览量:

摘 要：亲缘较近的羊群中开展亲子鉴定时，利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定，清晰地将父母与母本信息显示出来，其遗传多态性较高、检测速度快和准确高效的特点，能有效的预防近亲繁殖，所以，近年来，微卫星标记在羊亲子鉴定中得到了广泛的应用。基于此，主要

　　摘　要：亲缘较近的羊群中开展亲子鉴定时，利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定，清晰地将父母与母本信息显示出来，其遗传多态性较高、检测速度快和准确高效的特点，能有效的预防近亲繁殖，所以，近年来，微卫星标记在羊亲子鉴定中得到了广泛的应用。基于此，主要就如何利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定进行探究。

　　关键词：微卫星标记； 羊； 亲子鉴定

　　1　利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定的必要性

　　所谓亲子鉴定，主要是采用分子遗传学、生物学和医学等方面的理论技术知识，结合子代与亲代的生理机能和形态构造以及遗传物质基础等相似的特点，对遗传特征进行分析，从而判定子代和亲代之后是否具有亲缘关系而采取的一种鉴定方法。利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定，主要是为了满足建立被检测对象的系谱档案的需要，同时，在确定被检测对象的归属时也得到了广泛的应用，尤其是在诸多诉讼案件处理中，利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定，对于羊的归属性的确定具有十分重要的意义。同时，通过亲子鉴定，能有效的预防羊群之间出现近亲繁殖的情况。由此可见，不管是为了建立系谱档案、确定归属，还是为了预防近亲繁殖过程中均具有十分重要的意义[1]。

　　2　如何利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定

　　通过上述分析，我们对利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定的必要性有了一定的认识，那么我们在实际工作中应如何利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定呢，下文将做具体介绍。

　　2.1　及时的提取血样和基因组DNA　为了对羊进行亲子鉴定，作为鉴定人员必须紧密结合实际需要，科学合理选用被检测的对象。在被检测的对象中，对其血样和基因组DNA进行提取，主要就是在羊的颈部的静脉中采集6 mL的血液，确定SDS和EDTA存在的前提下，利用蛋白酶K将蛋白质尽可能地消除，利用氯、酚将羊的基因组DNA提取出来，从而便于PFLP和RAPD的分析。

　　2.2　利用PCR仪实施聚合酶链式反应　在提取羊的基因组DNA的基础上，为了对其进行亲子鉴定，就应利用PCR仪实施聚合酶链式反应。达到扩增聚合酶链式反应的目的。主要是利用聚合酶链式反应的基本原则，将所采集血样所处的温度进行调整，促进聚合酶链式反应得到有效的扩增。就羊而言，其血清所处的温度为72 ℃时，能有效的促进聚合酶链式反应的扩增，而这一过程就离不开PCR仪的支持，利用其有效的控制温度，为整个聚合酶链式反应的扩增奠定基础[2]。

　　2.3　切实做好聚合酶链式反应所得产物的电泳检测工作　在利用PCR仪实施聚合酶链式反应的基础上，对所得的产物进行电泳检测工作，主要是利用移动界面电泳仪制作电泳图。在实际制作过程中，一般是选用25 μL的产物，并将4 μL的3，3′，5，5′-四溴苯酚磺酰酞与产物混合中，加入浓度为100%的PAAG置于电泳仪之中，并确保电泳仪的电压始终在165±15 V之间，时间在7±1 h之间，当电泳结束后，对其实施固定和染色以及显影等处理后，利用凝胶成像系统对其进行拍照。值得一提的是，在整个染色和显影处理过程中，由于鉴定的对象为羊，所以采取银染的方式进行处理。在处理过程中，首先是在固定液中放入凝胶，并预处理10 min后，再在染色液中加入凝胶进行染色，整个染色时间在25～30 min之内，其次将其取出，并利用蒸馏水将其漂洗，漂洗的时间一般在15～20 s之间，并将其置入显影液之中，待经过8～10 min之后，一般会出现条带，就应及时的将凝胶取出，并利用自来水对其快速的漂洗两次，最后将其放入固定液之中，一般10 min后就能对其进行观测并拍照，冲洗出电泳图。

　　2.4　加强数据处理，计算父权概率　一是加强对基因型频率的计算，在计算基因型频率时，主要是采用基因型个体数与测定群体总数的商确定，从而将羊的遗传特征表示出来。二是利用x2对Handy Weinberg平衡状态进行检验，即结合确定的基因型频率对x2的值进行确定，在实际计算时，主要采取这一公式：即 。式中，E代表理论值，O代表实际观察值。三是在做好上述工作的基础上，对父权概率进行计算的目的是对亲子关系进行判定的主要依据。因而在对公羊或母羊X(父或母)与对公羊或母羊Y(子)的概率计算时，主要采取公式： ，从而结合确定的PI对父权相对机会利用公式 进行计算，最终结合二者的相似度确定二者的关系[3]。

　　3　结语

　　如何利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定进行探讨具有十分重要的意义，作为新时期的专业鉴定人员，必须紧密结合时代发展的需要，致力于自身专业技术水平的提升，充分意识到利用微卫星标记对羊进行亲子鉴定的必要性，及时的提取血样和基因组DNA，利用PCR仪实施聚合酶链式反应，切实做好聚合酶链式反应所得产物的电泳检测工作，加强数据处理，计算父权概率，更好地确保亲子鉴定工作的开展。

　　参考文献

　　[1]　刘云芳，高剑峰，潘晓亮，等.绵羊全血中DNA的微量提纯. 石河子大学学报：自然科学版，1997(2)：52.

　　[2]　钱林东，张自芳，田应华，等.利用微卫星DNA标

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