运用HPLC测量麻黄有效成分盐酸麻黄碱的含量

时间：2015-12-20 17:36:49 所属分类：药学 浏览量:

驱寒抗感颗粒为纯中药制剂，原处方是北京市密云县中医医院临床验方，后经化裁而成。全方由麻黄、荆芥、苦杏仁、桂枝、甘草等药材组成，具有散寒解表、祛风止咳的功效，主治外感风寒表证。该制剂临床使用后效果良好，且比原汤剂服用量小，服用方便，患者易于

　　驱寒抗感颗粒为纯中药制剂，原处方是北京市密云县中医医院临床验方，后经化裁而成。全方由麻黄、荆芥、苦杏仁、桂枝、甘草等药材组成，具有散寒解表、祛风止咳的功效，主治外感风寒表证。该制剂临床使用后效果良好，且比原汤剂服用量小，服用方便，患者易于接受。为了有效地控制制剂质量，保证药效，经过处方分析，我们采用薄层色谱( TLC) 法对该制剂中的主要药物麻黄、桂枝、苦杏仁进行了定性鉴别，应用高效液相色谱( HPLC) 法对麻黄中的主要有效成分盐酸麻黄碱进行了含量测定，以便建立一种科学准确且操作简便的质量控制标准。

　　1 材 料

　　1． 1 仪器 1200 型高效液相色谱仪，美国安捷伦科技公司; AD －2 百万分之一电子天平，美国 PerkinElmer 公司;H66005 超声波清洗器，无锡市超声电子设备厂。

　　1． 2 药品与试剂 盐酸麻黄碱、桂皮醛、苦杏仁苷对照品，中国食品药品检定研究院，批号分别为: 171241 －201007、110710 － 201016、185361 － 201006; 驱寒抗感颗粒，北京市密云县中医医院制剂室自制，批号: 20120705，20120707，20120709; 水为重蒸水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2． 1 定性鉴别

　　2． 1． 1 麻黄的 TLC 鉴别取驱寒抗感颗粒 5 g，研细，加适量浓氨水湿润，再加三氯甲烷 50 mL，加热回流 1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加入 1 mL 甲醇使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液; 按驱寒抗感颗粒处方及工艺制备不含麻黄的阴性样品，同法制成缺麻黄阴性对照溶液; 另取盐酸麻黄碱对照品适量，加甲醇制成含量 1 mg/mL 的溶液，作为对照品溶液。照 TCL 法试验，分别吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以三氯甲烷 － 甲醇－ 浓氨试液( 20∶ 5∶ 0． 5) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于 105 ℃加热至斑点显色清晰。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的红色斑点; 阴性对照无干扰。麻黄的 TLC 见封 3，图 1。

　　2． 1． 2 苦杏仁的 TLC 鉴别取驱寒抗感颗粒 5 g，研细，加甲醇 50 mL，加热回流 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加入 2 mL 甲醇使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液; 按驱寒抗感颗粒处方及工艺制备不含苦杏仁的阴性样品，同法制成缺苦杏仁阴性对照溶液; 另取苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成含量 2 mg/mL 的溶液，作为对照品溶液。

　　照 TCL 法试验，分别吸取上述溶液各 3 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以三氯甲烷 － 乙酸乙酯 － 甲醇 － 水( 15∶ 40∶22∶ 10) 5 ～ 10 ℃ 放置 12 h 的下层溶液作为展开剂，展开，取出，立即用 0． 8%磷钼酸的 15% 硫酸乙醇溶液浸板，在 105 ℃加热至斑点显色清晰。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点; 阴性对照无干扰。苦杏仁的 TLC 见封 3，图 2。

　　2． 1． 3 桂枝的 TLC 鉴别取驱寒抗感颗粒 5 g，研细，加乙醇 25 mL，超声( 功率 120 W，频率 40 kHz) 处理25 min，滤过，滤液作为供试品溶液; 按驱寒抗感颗粒处方及工艺制备不含桂枝的阴性样品，同法制成缺桂枝阴性对照溶液; 另 取 桂 皮 醛 对 照 品 适 量，加 乙 醇 制 成 含 量1 μL / mL的溶液，作为对照品溶液。照 TCL 法试验，分别吸取上述供试品和阴性对照溶液各 10 μL，对照品溶液2 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以石油醚 ( 60 ～90 ℃ ) － 乙酸乙酯( 17∶ 3) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点; 阴性对照无干扰。桂枝的 TLC 见封 3，图 3。

　　2． 2 盐酸麻黄碱的含量测定

　　2． 2． 1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱: UItimateAQ － C18 色谱柱( 250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ; 流动相: 乙腈－ 0． 02 mol / L 磷酸二氢钾溶液( 含 0． 2% 三乙胺，磷酸调pH 2． 5) ( 2 ∶ 98) ; 检测波长: 210 nm; 柱温: 35 ℃ ; 流速:

　　1． 0 mL / min。在此条件下，盐酸麻黄碱能够与其他成分很好的分离，供试品中的盐酸麻黄碱保存时间与对照品相同，并且阴性对照无干扰。见图 4。

　　2． 2． 2 对照品溶液的制备 精确称取适量盐酸麻黄碱对照品，加入0． 1%盐酸甲醇溶液制成含量 42． 30 μg/mL 的溶液，即得。2． 2． 3 供试品溶液的制备 取驱风抗感颗粒 1 g，研细( 过 5 号筛) ，精确称取 0． 5 g，置于 50 mL 具塞量瓶中，加入 1． 0 mL 浓氨试液，密闭，使之充分湿润，加入氯仿40 mL，超声( 功率 120 W，频率 40 kHz) 处理 20 min，放置至室温，氯仿定容，过滤，弃去初滤液。精确量取 25 mL 续滤液，加入 0． 1%盐酸甲醇溶液 2 mL，摇匀，挥干，残渣加入 0． 1%盐酸甲醇溶液使溶解，移至 5 mL 量瓶中，加入0． 1% 盐酸甲醇溶液定容，离心，分取上清液，即得供试品溶液。

　　2． 2． 4 阴性对照溶液的制备 按驱寒抗感颗粒处方及工艺制备不含麻黄的阴性样品，再按“2． 2． 3”项下方法制成阴性样品溶液。

　　2． 2． 5 线性关系考察 取对照品适量，加入 0． 1% 盐酸甲醇 溶 液，分 别 配 成 8． 46、12． 69、21． 15、42． 30、63． 45 μg / mL的盐酸麻黄碱对照品溶液，吸取各对照品溶液 5 μL，按 2． 2． 1 项下色谱条件，依次注入液相色谱仪中进行测定。以峰面积积分值( Y) 为纵坐标，对照品溶液进样量( X) 为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程 Y =2． 155 × 103X + 1． 613( r = 0． 999 9，n = 5) 。结果，盐酸麻黄碱进样量在 0． 042 3 ～0． 317 3 μg 范围内与峰面积积分值有良好线性关系。

　　2． 2． 6 精密度试验 取同一盐酸麻黄碱对照品适量，按2． 2． 1 项下色谱条件测试，连续进样 6 次，每次 5 μL。结果，盐酸麻黄碱峰面积的相对标准偏差( RSD) =0． 87% ( n= 6) ，表明仪器精密度良好。

　　2． 2． 7 稳定性试验 取同一供试品溶液适量，在室温下放置 0、2、4、6、12、24 h，按 2． 2． 1 项下色谱条件分别进样5 μL进行测定。结果，RSD = 0． 83% ( n = 6) ，表明供试品溶液在 24 h 内稳定。

　　2． 2． 8 重复性试验 取同一批号样品适量，按 2． 2． 3 项下方法制成供试品溶液 6 份，按 2． 2． 1 项下色谱条件分别进样 5 μL 进行测定。结果，盐酸麻黄碱含量的 RSD =1． 1% ( n = 6) ，表明方法重复性良好。

　　2． 2． 9 加样回收试验 精密称取已知盐酸麻黄碱含量( 0． 425 0 mg/g) 的同一批次( 批号: 20120705) 样品 6 份，每份约 0． 5 g，分别精密加入盐酸麻黄碱对照品 0． 120 0、0． 120 0、0． 140 0、0． 140 0、0． 160 0、0． 160 0 mg，按 2． 2． 3项下方法制成供试品溶液，按上述 2． 2． 1 项下色谱条件测定含量，并计算加样回收率。结果见表 1。【表1】

　　　　2． 2． 10 样品含量测定 称取 3 批样品适量，按 2． 2． 3 项下方法制成供试品溶液，按2．2． 1 项下色谱条件测定，以峰面积外标法计算盐酸麻黄碱的含量。结果，3 批样品中盐酸麻黄碱的含量分别为0．425 0、0．417 4、0．409 8 mg/g。

　　3 讨 论

　　在驱寒抗感颗粒组方中麻黄、苦杏仁、桂枝均为主药，因此对其进行了定性鉴别，且麻黄为君药，对其有效成分盐酸麻黄碱的研究较多，检测方法成熟准确，故对其进行了 HPLC 含量测定。在对麻黄、苦杏仁、桂枝的定性鉴别中，按2010 版《中华人民共和国药典》即可取得良好结果。

　　对盐酸麻黄碱的定量鉴别，我们在参考文献方法的基础上，分别用 1． 44%磷酸溶液、氯仿和碱性甲醇作为提取溶剂，发现氯仿的提取率最高且峰形理想。经方法学考察表明，本方法操作简便，准确性、可靠性、重复性好，可作为驱寒抗感颗粒的质量控制标准。

　　参考文献　　　　［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典 2010 年版( 一部)［S］． 北京: 中国医药科技出版社，2010: 300，187，259．　　［2］ 刘睿，王宁，刘志辉． RP － HPLC 同时测定宣肺止咳口服液中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱及苦杏仁苷含量［J］． 中国实验方剂学杂志，2011，17( 16) : 91 －93．

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