闂傚倸鍊风粈渚€骞夐敓鐘冲仭妞ゆ牜鍋涢崹鍌炲级閸偄浜栧ù婊呮嚀闇夐柨婵嗘噺鐠愶繝鏌i悢娲绘綈缂佺粯鐩獮瀣倷濞堟寧娈归梻浣风串缂嶄焦绂嶉崼鏇炵畺婵°倐鍋撻柍钘夘樀楠炲酣鎳為妷顔瑰亾瀹ュ應鏀介柣姗嗗亜娴滈箖姊虹憴鍕姸婵☆偄瀚埀顒佽壘椤﹂亶鍩€椤掆偓缁犲秹宕曢柆宥呯疇閹兼惌鐓夌紞鏍煥閻曞倹瀚�

推荐期刊

探讨脊髓后角AS参与痛觉调节的作用机制

时间:2015-12-20 17:10:45 所属分类:基础医学 浏览量: 91

病理性疼痛的一个重要分类是炎症性痛.炎性痛是是由各种生物(细菌、真菌、病毒等)、物理、化学或免疫源性炎症在细胞水平对组织完整性所造成的损伤.它的发生发展与组织损伤和炎症的[1]产生密切相关 .福尔马林模型是一个公认的诱导炎性痛的理想模型,福尔马林经

婵犵數濮撮惀澶愬级鎼存挸浜鹃柡鍥ュ灩绾惧綊鏌i悢绋款棆妤犵偞鎹囬弻娑滎槼妞ゃ劌绻樺顐﹀磼濞戞牔绨婚梺鍦劋閸ㄧ敻鍩€椤掑倹鏆€规洘鍨块獮姗€寮妷锔绘綌闂備浇顫夐崕鍏兼叏閵堝鏁佺€广儱鎳夐弨浠嬫煟濮楀棗浜滃ù婊堢畺濮婅櫣鎲撮崟顐㈠Ц濠碘槅鍋勭€氼噣鍩€椤掍浇澹樻い锕備憾閸┾偓妞ゆ巻鍋撶紒鐘茬Ч瀹曟洟鏌嗗鍛枃闁瑰吋鎯岄悡澶岀礊閺嶎厽鐓忛柛顐g箖婵吋绻涢幘鎰佺吋闁哄本娲熷畷鐓庘攽閸パ勵仭闂佽崵濮甸崝蹇涘礈濠靛牊宕叉繛鎴炵鐎氭氨鎲告惔锝傚亾濮樼偓瀚�

  病理性疼痛的一个重要分类是炎症性痛.炎性痛是是由各种生物(细菌、真菌、病毒等)、物理、化学或免疫源性炎症在细胞水平对组织完整性所造成的损伤.它的发生发展与组织损伤和炎症的[1]产生密切相关 .福尔马林模型是一个公认的诱导炎性痛的理想模型,福尔马林经过一定倍数的稀释后,注射于小鼠或大鼠后足掌部皮下,可提供一个持续的伤害性刺激,从而激发一种明显的、弥散[2]的、长时间持续的自发性疼痛行为反应 .研究显示,在小鼠福尔马林疼痛模型中,脊髓谷氨酸(glutamate,[3]Glu)水平显着增高 .Glu作为一种兴奋性神经递质,是诱发疼痛形成和持续的重要因素.

  星形胶质细胞(Astrocytes,AS)作为中枢神经系统中,数量最多、体积最大的一类胶质细胞,在维持神经元内外环境、生存、迁移、免疫调节、信号转导、等方面具有重要作用.特别是,AS通过谷[4]氨酸-谷氨酰胺循环来调控谷氨酸的传递 .AS通过其膜上特异性谷氨酸转运体1(glutamate transporter1, GLT1)和谷氨酸天冬氨酸转运体(glutamateaspartatetransporter,GLAST)将突触间隙中的Glu摄入,并由谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase, GS)转化为谷氨酰胺输送回神经元,从而有效维持持续的谷氨酸能突触传递和保护突触后神经元免受兴奋性毒性损害.研究证实,在福尔马林致炎性痛模型中存在[5]脊髓AS的激活,提示AS参与了炎性痛的过程 .然而,在此模型中,活化的AS是否增强对Glu再摄取和转化,进而参与痛觉的调控尚未见报道.

  综合以上研究背景,本实验选择福尔马林制备炎性痛模型,通过观察脊髓后角胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP), GLT1, GLAST和GS表达的变化,以探讨脊髓后角AS参与痛觉调节的作用机制.

  1 材料和方法

  1.1 动物分组及模型制作

  健康的雄性ICR小鼠20只(南京医科大学动物中心提供),体重26-28g.动物随机分为2组.①模[6]型组:在安静、自然光环境下,按文献 方法复制炎性痛模型,用微量注射器在小鼠右后足背皮下注射2.5%的福尔马林40μl.②对照组:动物行40μl生理盐水后肢足背注射.60min后,小鼠行断头术处死,快速取脊髓L4-L5节段,于冰盘中快速分离脊髓背侧,-20℃保存待用.兔抗GFAP抗体、兔抗GS抗体、兔抗GLT-1抗体和兔抗GLAST抗体均购于武汉博士德公司,Glu定量检测试剂盒由南京建成生物研究所提供.

  1.2 Glu检测试剂盒检测生化指标

  利用南京建成生物研究所提供Glu检测试剂盒,测定L4-L5节段脊髓后角中Glu的含量,操作步骤严格按照试剂盒说明进行.

  1.3 Western blot检测

  取两组小鼠组织,进行蛋白提取和浓度测定.10% SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白结束后,转移槽转移蛋白质到PVDF膜.转移后的PVDF膜用含5%脱脂奶粉的TBST缓冲液室温包被2h后,浸入含5%脱脂奶粉的TBST稀释的一抗(GFAP,1 1000;GS,1:500,GLT-1,1:1000,GLAST,1:1000)中 ,4℃过夜,TBST漂洗后转入用5%脱脂奶粉的TBST稀释的HRP偶联的二抗(1:1000)中,室温2h,TBST充分漂洗后,ECL发光系统检测目的蛋白及GAPDH的蛋白表达水平.本部分实验重复3次.吸光度值测定应用Leica全自动图像分析仪测定,以目的蛋白的光密度值(OD)与内参OD的比值作为目的蛋白相对光密度值.

  1.4 统计学分析

  数据用均数±标准误(X±S.E.M.)表示.采用t检验进行组间数据比较.P < 0.05被认为存在显着性差异.

  2 结果

  2.1 脊髓后角Glu含量的测定

  与对照组相比,模型组脊髓后角Glu含量显着升高(图1)

  2.2 GFAP、GLT1、GLAST和GS在脊髓的表达

  Western-blot检测结果显示,与对照组相比,模型组脊髓后角内GFAP, GLT1,GS和GLAST蛋白水平升高,差异有显着性(图2).

  3 讨论

  为了研究炎性痛的机制,通常通过小鼠或大鼠后足注射炎性物质制作炎性痛觉过敏模型来模拟患者临床疼痛症状.目前,福尔马林致痛模型是一个较好的用于研究急性组织损伤所致持续性炎性痛的[2]动物模型 .Glu是中枢神经系统主要的兴奋性氨基酸神经递质,因伤害性刺激、组织损伤或神经损伤而释放.福尔马林引起的组织损伤和炎症使脊髓Glu释放增加,神经元兴奋性增高,兴奋阈值降低,[7]引起中枢敏化和疼痛过敏 .本实验中,脊髓后角Glu含量的增高也证实了这一观点.

  目前,越来越多的研究表明AS在中枢敏化方面具有关键性作用,特别是AS通过谷氨酸-谷氨酰胺循环对Glu起重要调节作用 .AS通过Glu转运体摄取了突触间隙中80%的Glu,并通过GS催化,转变成谷氨酰胺,再转运到神经末梢,重新生成Glu.本研究中,我们检测到脊髓后角AS蛋白表达上升,这一结[9]果较之既往仅观察AS形态的改变 ,从蛋白水平进一步证实了在此模型中,存在脊髓AS的激活.GLAST和GLT1选择性分布在AS细胞膜上,GS在[4]脊髓也主要存在于AS内 .研究表明,药物封闭AS上Glu转运体会导致疼痛过敏并增强脊髓后角神经元对[10]于外周机械以及热刺激的反应性 .而下调Glu转运[11]体的表达也与痛觉增敏相关 .本实验结果显示,脊髓后角内Glu转运体GLT1、GLAST均有不同程度升高.这可能是在高浓度Glu的刺激下,AS通过上调GLT-1和GLAST来增强Glu摄取能力,以便维持细胞外低水平的Glu浓度和阻止Glu兴奋性毒性.

  Glu在突触间隙浓度的维持还依赖于GS的作用.Glu被细胞摄取后,必须经过GS转化为谷氨酰胺才失去其毒性作用.研究显示,应用GS抑制剂后,阻断了谷氨酸-谷氨酰胺循环通路,降低了Glu摄取率,[12]从而产生细胞毒性 .本实验中,模型组增高的GS,不仅清除了AS摄取的Glu,而且为神经元提供了更多的合成Glu的原料谷氨酰胺,从而维持了突触末梢Glu的持续释放.

  总之,本实验首次阐明在福尔马林致炎性痛模型中,脊髓AS通过谷氨酸-谷氨酰胺循环参与疼痛传递的调节.根据此结果推测,在持续性炎性痛中,应用针对谷氨酸转运体、或者GS的药物不失为一种新的治疗方法.

  【参考文献】

  [1] Yaster M, Guan X, Petralia RS, et al. Effect of inhibition of spinalcord glutamate transporters on inflammatory pain induced byformalin and complete Freund's adjuvant [J]. Anesthesiology, 2011,114: 412-423.

  [2] Hough LB, Rice FL. H3 receptors and pain modulation: peripheral,spinal, and brain interactions [J]. J Pharmacol Exp Ther, 2010, 336:30-37.

  [3] Skyba DA, Lisi TL, Sluka KA. Excitatory amino acid concentrationsincrease in the spinal cord dorsal horn after repeated intramuscularinjection of acidic saline [J]. Pain, 2005, 119: 142-149.

  [4] Jiang E, Yan X, Weng HR. Glial glutamate transporter and glutaminesynthetase regulate GABAergic synaptic strength in the spinal dorsalhorn [J]. J Neurochem, 2012, 121: 526-536.

  [5] Qin M, Wang JJ, Cao R, et al. The lumbar spinal cord glial cellsactively modulate subcutaneous formalin induced hyperalgesia in therat [J]. Neurosci Res, 2006, 55: 442-450.

  [6] Ohsawa M, Mutoh J, Asato M, et al. Carnosine has antinociceptiveproperties in the inflammation-induced nociceptive response in mice[J]. Eur J Pharmacol, 2012, 682: 56-61.

  [7] Vidal-Torres A, Carceller A, Zamanillo D, et al. Evaluation offormalin-induced pain behavior and glutamate release in the spinaldorsal horn using in vivo microdialysis in conscious rats [J]. JPharmacol Sci, 2012, 120: 129-132.

  [8] Shen J. Modeling the glutamate-glutamine neurotransmitter cycle [J].Front Neuroenergetics, 2013, 5: 1-13.

  [9] Wang J, Geng B, Shen HL, et al. Amino acid transport system A isinvolved in inflammatory nociception in rats [J]. Brain Res, 2012,1449: 38-45.

  [10] Weng HR, Chen JH, Cata JP. Inhibition of glutamate uptake in thespinal cord induces hyperalgesia and increased responses of spinaldorsal horn neurons to peripheral afferent stimulation [J].Neuroscience, 2006, 138: 1351-1360.

  [11] Nie H, Weng HR. Impaired glial glutamate uptake inducesextrasynaptic glutamate spillover in the spinal sensory synapses ofneuropathic rats [J]. J Neurophysiol, 2010, 103: 2570-2580.

  [12] Tsuboi Y, Iwata K, Dostrovsky JO, et al. Modulation of astroglialglutamine synthetase activity affects nociceptive behaviour andcentral sensitization of medullary dorsal horn nociceptive neuronsin a rat model of chronic pulpitis [J]. Eur J Neurosci, 2011, 34:292-302.

濠电姷鏁告慨鐑藉极閸涘﹥鍙忓ù鍏兼綑閸ㄥ倿鏌i悢宄扮盎闁兼澘娼″鍫曞醇濞戞ê顬夊┑鐐叉噽婵灚绌辨繝鍥ч柛灞剧煯婢规洟姊洪崨濠庢疁濞存粌鐖煎濠氬Ω閳哄倸浜為梺绋挎湰缁嬫垿顢旈敓锟�:闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹妞嬪海鐭嗗〒姘e亾鐎规洦鍨堕獮鎰償閵忥紕褰块梺鐟板悑閻n亪宕瑰ú顏勭煑闊洦绋掗悡鐔兼煏韫囧﹥鍤夌憸鐗堝笒缁€鍕煟濡偐甯涢柣鎾存礋閺岀喐瀵肩€涙ɑ閿梺鍝勵儑閸犳牠寮诲☉姘e亾閿濆骸浜炲褜鍓熼弻鏇㈠炊瑜嶉顓犫偓娈垮櫘閸o絽鐣烽崼鏇椻偓鏍敊閼恒儱纾冲┑顔硷工椤嘲鐣烽悢纰辨晝闁靛洦濡搁崶銊у幐闁诲繒鍋犻褔鍩€椤掍胶澧辩紓鍌涙崌閹崇偤濡烽妷褏鐛┑鐘灱濞夋盯寮甸鍕柧濠靛倸鎲¢埛鎺懨归敐鍫燁仩閻㈩垱鐩弻鐔哄枈閸楃偘绨藉┑鈥冲级閸旀瑥顕i幘顔藉亹闁归鐒︾紞妤呮⒒娴e憡鎯堥柛鐕佸亰閹囧幢濞嗘垳绗夐梺鎸庣箓濡稓绮绘ィ鍐╃厱闁斥晛鍠氬▓娆撴倵濮橆厽绶查棁澶嬬節婵犲倸顏╅柛鏂诲€濆Λ浣瑰緞閹邦厾鍙嗗┑鐘绘涧濡瑩骞栭幇鐗堢厱闁哄倹顑欓崕鎰庨崶褝韬い銏$☉椤繈骞戦幇顒佸創闂傚倷绀侀幖顐︽儗婢跺本宕叉繝闈涙閺嗭附銇勮箛鎾村櫤濠殿垱鎸抽弻娑樷槈濮楀牆濮涙繛瀛樼矋閻楃姴顫忕紒妯肩懝闁逞屽墴閸┾偓妞ゆ帒鍊告禒婊堟煠濞茶鐏︾€规洏鍨藉畷銊︾節娴h櫣鐣鹃梻浣虹帛閸旀牕岣垮▎鎴犵當鐟滃繒妲愰幒妤婃晩閻熸瑥瀚悵鏇㈡⒑闂堟稓澧崇紓宥勭閻e嘲顫滈埀顒佷繆閹间焦鏅滅紓浣癸供濡劑姊婚崒姘偓椋庢濮橆兗缂氶柤濮愬€愰崑鎾绘濞戞氨鍔悗瑙勬磸閸ㄦ椽濡堕敐澶婄闁靛ě灞芥櫍闂傚倷鑳舵灙缂佺粯锚铻為悹鎭掑妽瀹曟煡鏌涢埄鍏︽粍绂嶅⿰鍫熺厵闂侇叏绠戦弸娑㈡煛鐎n亪顎楅棁澶嬬節婵犲倸鏆欓柍閿嬫⒒缁辨帗娼忛妸锕€闉嶉梺鐟板槻閹冲繘藝閻楀牊鍎熸俊顖滅帛濞呭啴姊婚崒娆戝妽闁诡喖鐖煎畷婵嗩吋閸滀焦瀵岄梺鑺ッˇ浠嬪吹閺囥垺鐓欓柟顖涙緲琚氶梺绋款儏鐎氫即寮婚敐澶婄闁惧浚鍋呭畷鍐差渻閵堝棙鐓ユい锔诲灦閳ユ棃宕橀鍢壯囨煕閳╁喛渚涙慨濠傛健濮婅櫣绮欏▎鎯у壉闂佸憡姊瑰ú鐔兼晲閻愭祴鏀介悗锝庘偓顓涙櫊閺屽秹宕崟顐熷亾婵犳艾鐭楅柛鈩冦仜閺€浠嬫煟閹邦厽缍戦柣蹇ョ畱閻f繈鏁愰崨顔间淮闂佽鍠氶崑銈夊蓟閵娧€鍋撻敐鍐ㄥ缂併劌顭峰娲传閸曨剙顦╁銈冨妼濡鍩㈠鍡欑瘈闁告洏鍔屾禍鐐箾閸繄浠㈤柡瀣ㄥ€曢…鑳槼妞ゃ劌锕悰顕€宕卞☉妯肩潉闂佸壊鍋呯换宥呩缚婵犲洦鈷戦柡鍌樺劜濞呭懘鏌涢悤浣镐喊妞ゃ垺姊圭€佃偐鈧稒菤閹风粯绻涙潏鍓у埌闁硅绻濋獮鍡涘醇閵夛妇鍘辨繝鐢靛Т婵亶宕烽鐐茬柧闂傚倷绶氬ḿ褑鍣归梺绋挎湰缁本鏅舵ィ鍐┾拻濞达綀娅g敮娑㈡煕閺冣偓濞叉牞鐏掓繝鐢靛Т濞层倝鎮块鈧弻娑樷槈濡吋鎲奸梺缁樻尵婵兘鎯€椤忓牆绾ч柛顭戝枦閸╃偞绻濋埛鈧崒姘ギ闂佸搫鐭夌紞浣逛繆閻戣棄唯闁挎洍鍋撴繛鍫燁殜濮婃椽宕崟顒佹嫳缂備礁顑嗛崹鍧楀春閵忊剝鍎熼柕濞垮劤閻も偓婵$偑鍊栫敮鎺楀磹妞嬪孩顫曟慨妞诲亾婵﹦绮粭鐔煎焵椤掆偓宀h儻顦查摶鐐翠繆閵堝懏鍣归柣銈庡枛闇夐柛蹇撳悑缂嶆垹绱掗悩闈涙灈闁诡喗顨呴埥澶娾枍閾忣偄鐏﹂柛鎺戯功閳ь剟娼ч幗婊呭婵傚憡鍊甸柨婵嗛楠炴鐥鈩冪【闂囧绻濇繝鍌氼伀濠⒀冪仛閹便劍绻濋崘鈹夸虎濡ょ姷鍋為崝鏍箚閺冨牊鏅查柛灞句緱濞兼棃姊婚崒娆戭槮闁圭⒈鍋婇幃褍饪伴崼婵堫槶濠殿喗蓱婢у酣宕戦幘缁橆棃婵炴垶鐗曟禒顕€鎮楃憴鍕闁挎洏鍨介妴浣糕枎閹炬潙娈愰梺鍐叉惈閸燁偊鎮欐繝鍌楁斀闁绘ê鐏氶弳鈺佲攽椤旂虎妫庡褎绻堝铏圭矙濞嗘儳鍓遍梺鍦规晶钘壩i幇鏉跨闁归绀侀幃鎴︽⒑缁洖澧查柨鏇楁櫅铻為柛鎰靛枟閳锋垹鐥鐐村櫤闁绘繍浜弻鐔兼偡閻楀牆鏋犻悗娈垮櫘閸嬪﹪鐛Ο鑲╃<婵☆垳绮鐔兼⒒娴h姤纭堕柛锝忕畵楠炲繘鏁撻敓锟�.闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹妞嬪海鐭嗗〒姘e亾鐎规洦鍨跺畷绋课旀担绯曞亾閸洘鐓曟い鎰Т閸旀岸鏌i幒鎴犱粵闁靛洤瀚伴獮鎺戭吋閸ヨ埖袦濠电姭鎷冪仦鐣屼画缂備胶绮粙鎾寸閿曞倸纾兼慨姗堢到娴滅偓绻濋棃娑卞剰闁藉啰鍠栭弻銊モ槈濡警浠遍梺绋款儐閹瑰洭寮幇顓熷劅闁炽儴灏欓弫鏍⒒娴h銇熼柛妯恒偢椤㈡牗寰勯幇顒冩憰濠电偞鍨堕崺鍐磻閹剧粯鏅查幖瀛樼箘閺佹牠鏌℃担鍝ュⅵ闁诡喗顨呴埢鎾诲垂椤旂晫浜為梻浣告啞椤ㄥ棙绻涙繝鍥ュù锝囩《濡插牊淇婇鐐存暠闁诲骸顭峰娲偡闁箑娈舵繝娈垮櫘閸欏啫顕g粙搴撴瀻闁瑰墽琛ラ幏缁樼箾鏉堝墽鎮奸弸顏堟煙椤旇棄鐏︾紒缁樼箞婵偓闁宠棄鎳撻埀顒佸椤ㄣ儵鎮欑拠褍浼愬銈嗘尭閵堢ǹ鐣烽崼鏇炵厸闁告劦浜濆▓浠嬫⒒閸屾瑧顦﹂柟纰卞亞缁棃寮婚妷銉ь槷闁瑰吋鐣崝宀勬偂濠靛鐓涢柛鎰╁妼閳ь剛鏁诲畷鎴﹀箻閼姐倕绁﹂梺鍓茬厛閸犳牗鎱ㄦ惔鈾€鏀介柍钘夋娴滄繃銇勯妸銉伐闁伙絿鍏樻慨鈧柕鍫濇噽椤斿﹤鈹戞幊閸婃捇鎳楅崼鏇炲偍闁归棿鐒﹂埛鎴︽煕閹炬潙绲诲ù婊€绮欓弻娑氣偓锝庝簻椤忣亪鏌¢崨顓犲煟妞ゃ垺宀搁崺鈧い鎺嗗亾妞ゎ偄绻橀幖鍦喆閸曨偅鐎梻浣瑰缁诲倸螞濞嗘挻鍋熸慨妯垮煐閸婄敻鎮峰▎蹇擃仾缂佸矁娉曠槐鎾愁吋閸曨収妲銈嗘穿缂嶄礁鐣峰⿰鍕闁荤喐澹嗛敍蹇涙⒒娓氣偓濞佳囥偑閸偂绻嗛柛銉㈡櫇閻捇鏌涢幘妤€鎳愰敍婵嬫⒑缁嬫寧婀伴柣鐔村姂椤㈡瑦寰勯幇顓犲幈闁诲函缍嗛崑鍛暦瀹€鍕厸鐎光偓鐎n剛袦濡ょ姷鍋涢澶愬箖濞嗘挸骞㈡俊顖濇娴煎矂姊虹拠鈥虫灍妞ゃ劌锕妴浣割潩鐠鸿櫣鍔﹀銈嗗笒鐎氼剟鎷戦悢鍏肩叆婵犻潧妫欐刊鍏肩箾鐏忔牗娅婇柡宀嬬秮楠炴﹢宕樺顔煎Ψ闂備浇顕х换鎰涘▎鎴炲床婵炴垯鍨洪弲鏌ユ煕濞戝崬鏋熼柟顔界懇濮婃椽骞愭惔銏狀槱婵炲瓨绮犳禍顏堝箖娴兼惌鏁婇柣锝呯灱閹虫繈姊洪柅鐐茶嫰婢у鈧鍣崑濠囩嵁濡偐纾兼俊顖滅帛椤忕喖姊绘担鑺ョ《闁革綇绠撻獮蹇涙晸閿燂拷,闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹妞嬪海鐭嗗〒姘e亾妤犵偛顦甸弫鎾绘偐閸愯弓鐢绘俊鐐€栭悧婊堝磻濞戙垹鍨傞柛宀€鍋為悡鏇熴亜椤撶喎鐏ュù婊呭仦閵囧嫰鍩¢崘銊ュ箣闂佸搫鏈惄顖炪€侀弴銏″亹闁肩⒈鍏涢幃锝夋⒑鐠囨煡顎楅柣蹇斿哺閹繝鏁撻悩鑼舵憰闂侀潧艌閺呮粓宕戦崱娑欑厱閻忕偛澧介埥澶嬨亜韫囥儲瀚�闂傚倸鍊搁崐宄懊归崶顒夋晪鐟滃繘鍩€椤掍胶鈻撻柡鍛Т閻e嘲螣閼姐倗鐦堝┑顔斤供閸樻悂骞愰崘顔解拺闁告稑锕ユ径鍕煕鐎n偅宕岄柟铏崌瀹曠ǹ螖娴e搫寮伴梻濠庡亜濞村嫮寰婇懞銉ь洸闁哄稁鐏愰悷鎵冲牚闁告洦鍘鹃悡鈧梺鍓х帛閻楃娀寮婚妸銉㈡斀闁糕剝锚濞咃綁姊洪崫鍕棤闁稿鍊濆濠氬Ω閵夈垺顫嶉梺鎯ф禋閸嬪嫰顢旈敓锟�濠电姷鏁告慨鐑藉极閹间礁纾绘繛鎴欏灪閸嬨倝鏌曟繛褍鍟悘濠囨倵閸忓浜鹃梺鍛婃处閸撴瑦绂嶉柆宥嗏拺闁告稑锕g欢閬嶆煕閻樺啿鍝洪柕鍡楁嚇瀵濡烽敂鎯у箥闂備胶绮崹鍫曟晝閳轰讲鏋旈柡鍐ㄥ€荤壕濂告煃瑜滈崜鐔风暦閸楃偐妲堟繛鍡樺灥楠炴绻濈喊妯活潑闁搞劎鏁诲畷鎴﹀箛椤旇姤娈板┑鐐村灟閸ㄦ椽鎮¢悢鍝ョ瘈闁割煈鍋呯亸浼存倵濮樼偓瀚�.

转载请注明来自:http://www.zazhifabiao.com/lunwen/yyws/jcyx/20263.html